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　　PCR檢測試劑盒使用前后的注意事項

　　PCR檢測試劑盒里分好幾部分，重要的是PCR反應體系：DNA聚合酶，鎂離子，引物（測2個(gè)基因和1個(gè)內標需要3對引物），探針（也要3對探針，發(fā)出三種波長(cháng)的熒光），逆轉錄酶，dNTP（ATUCG會(huì )用部分U代替T），還有用于抗干擾的UDG酶（正常的DNA只有ATCG，PCR擴增出來(lái)的DNA會(huì )有AT（會(huì )用部分U代替T）CG，這樣擴增出來(lái)的DNA鏈中有U，UDG酶能切斷含U的DNA鏈，所以擴增DNA在空氣中形成的氣溶膠，不會(huì )影響其他樣本）、RNA酶抑制劑（空氣中液體里全都是RNA酶，會(huì )降解病毒的RNA）、Taq酶的抗體（Hotstart，常溫下能抑制Taq酶的活性，PCR擴增時(shí)高溫讓其失活，Taq酶就在高溫時(shí)恢復活性開(kāi)始擴增了）。

　　一、試劑盒使用注意事項

　?。?）所有試劑應按照適合溫度儲存。請勿反復凍融。

　?。?）使用后均需要對操作區進(jìn)行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無(wú)酶耗材。

　　二、樣本注意事項

　?。?）細胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。

　?。?）擴增2kb以?xún)绕?，細胞樣品濃度不超過(guò)1000個(gè)細胞。如若擴增片段超過(guò)2kb，可適當提高細胞濃度。

　?。?）不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理，防止交叉污染導致檢測結果偏差。

　　三、試劑盒使用過(guò)程中注意事項

　?。?）PCR過(guò)程中推薦使用陰性對照和陽(yáng)性對照。

　?。?）整個(gè)過(guò)程中使用的吸頭、離心管等耗材應丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，防止形成環(huán)境污染。

　?。?）PCR產(chǎn)物3’末端含有A，可直接進(jìn)行TA克隆。

　　四、試劑盒使用后注意事項

　?。?）PCR反應完成后，嚴禁在實(shí)驗區開(kāi)蓋。應在污染區進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。

　?。?）為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。